Plasmide CRISPR d'Activation (m) FADS6: sc-435879-ACT

Mouse Fads6 code pour FADS6, une désaturase d’acides gras présumée impliquée dans l’homéostasie du métabolisme lipidique et le remodelage des phospholipides des membranes cellulaires. En tant qu’élément de réseaux plus larges de désaturation et d’élongation des acides gras, FADS6 pourrait influencer l’équilibre entre acides gras saturés et insaturés, lequel façonne la fluidité membranaire, la fonction des organites et la signalisation médiée par les lipides. Une activité de désaturation altérée est fréquemment associée à des modifications du tonus inflammatoire, de la sensibilité au stress oxydatif et de l’adaptation métabolique dans des tissus à fort flux lipidique. Par conséquent, Fads6 présente un intérêt pour l’étude de la régulation, à l’échelle des voies, de la gestion des lipides dans des contextes métaboliques et neuro-immunitaires pertinents pour la biologie des maladies complexes.

FADS6 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Fads6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FADS6 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Fads6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Fads6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FADS6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Fads6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FADS6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FADS6 dans les cellules tumorales présentant une expression de Fads6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.