Plasmide CRISPR d'Activation (h) FADS1: sc-404735-ACT

FADS1 code la désaturase d’acides gras 1, une Δ5 désaturase localisée au réticulum endoplasmique qui catalyse des étapes clés de la biosynthèse des acides gras polyinsaturés à longue chaîne, notamment la conversion de l’acide dihomo-γ-linolénique en acide arachidonique et de l’acide eicosatétraénoïque en acide eicosapentaénoïque. En modulant les pools cellulaires d’AGPI ω-6 et ω-3, FADS1 influence la composition des membranes, la production de médiateurs lipidiques et la signalisation en aval liée à l’inflammation et à l’homéostasie métabolique. Des variations ou une dérégulation de FADS1 ont été associées à des profils lipidiques modifiés et à une susceptibilité à des traits complexes impliquant la biologie cardiométabolique et inflammatoire. Dans des modèles cellulaires et tissulaires, l’activité de FADS1 est couramment étudiée au sein des réseaux d’élongation/désaturation des acides gras et des voies contrôlant les précurseurs des eicosanoïdes et des médiateurs spécialisés de résolution.

FADS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FADS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FADS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FADS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FADS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FADS1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FADS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FADS1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FADS1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FADS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.