Plasmide Double Nickase (m) FA2H: sc-436124-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) FA2H correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FA2H Double Nickase (m) et le plasmide FA2H Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Fa2h. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) FA2H | sc-436124-NIC | 20 µg | $410.00 |
Fa2h code la 2‑hydroxylase des acides gras (FA2H), une enzyme associée au réticulum endoplasmique qui catalyse la 2‑hydroxylation des acides gras à longue chaîne, une étape clé dans la production de sphingolipides 2‑hydroxylés et de galactosylcéramides. Ces lipides contribuent à l’organisation des membranes et à la stabilité de la myéline, reliant l’activité de FA2H au métabolisme des sphingolipides, à la biologie des oligodendrocytes et aux interactions axone–glie. Une altération de la fonction de FA2H a été associée à des perturbations de la composition lipidique de la myéline et à des phénotypes neurodégénératifs, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’homéostasie lipidique dans le système nerveux. Dans des modèles murins, la perturbation de Fa2h est couramment utilisée pour explorer les mécanismes de myélinisation, la dynamique membranaire et les réponses de stress cellulaire dépendantes des lipides.
FA2H Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Fa2h dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Fa2h. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Fa2h. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Fa2h.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.