Plasmide Double Nickase (h) FA2H: sc-413143-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FA2H correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FA2H Double Nickase (h) et le plasmide FA2H Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FA2H. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FA2H | sc-413143-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) FA2H | sc-413143-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FA2H code la fatty acid 2-hydroxylase, une enzyme associée au réticulum endoplasmique qui produit des acides gras 2‑hydroxylés incorporés aux sphingolipides et aux galactolipides enrichis en myéline, tels que la galactosylcéramide et le sulfatide. En régulant l’hydroxylation des lipides, FA2H influence l’organisation des microdomaines membranaires, les interactions axone–glie et la fonction des oligodendrocytes au sein des voies métaboliques des sphingolipides. Une activité altérée de FA2H est liée à des défauts de maintien de la myéline et d’intégrité neuronale, et a été associée à des phénotypes neurodégénératifs, notamment des leucodystrophies et la paraplégie spastique héréditaire. FA2H constitue donc une cible pertinente pour des études mécanistiques reliant le remodelage lipidique au développement et à la stabilité du système nerveux, ainsi qu’aux réponses cellulaires au stress.
FA2H Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FA2H dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FA2H. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FA2H. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FA2H.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.