Plasmide CRISPR d'Activation (h) F-Spondin: sc-404101-ACT

Le gène humain **SPON1** code **F-spondine**, une glycoprotéine sécrétée de la matrice extracellulaire, enrichie dans le système nerveux, qui module la croissance des neurites, le guidage axonal et l’organisation synaptique. F-spondine interagit avec des récepteurs de surface cellulaire et des composants de la matrice afin d’influencer les voies de signalisation dépendantes de l’adhésion et les programmes de remodelage extracellulaire qui façonnent la connectivité neuronale. L’expression de **SPON1** est associée à la neurobiologie du développement et a été étudiée dans des contextes de neurodégénérescence et d’autres troubles où l’intégrité synaptique et la signalisation via la matrice sont perturbées. In vitro, la modification des niveaux de F-spondine est couramment utilisée pour explorer les mécanismes de communication cellule–matrice, de différenciation neuronale et de signalisation dépendante du microenvironnement.

F-Spondin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SPON1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

F-Spondin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SPON1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SPON1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de F-Spondin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SPON1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de F-Spondin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie F-Spondin dans les cellules tumorales présentant une expression de SPON1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.