Plasmide CRISPR/Cas9 KO EYA4 (h): sc-404355

Présentation

EYA4 code un membre de la famille Eyes Absent (EYA), qui agit comme coactivateur transcriptionnel et phosphatase, en intégrant des programmes de signalisation liés au développement et à la réponse au stress. Grâce à ses interactions avec les protéines SIX et DACH, EYA4 contribue à des réseaux de régulation génique qui contrôlent les décisions de destinée cellulaire, la différenciation et la morphogenèse spécifique des tissus. L’activité de phosphatase sur la tyrosine de la protéine a été associée à la modulation des réponses aux dommages de l’ADN et à d’autres processus dépendants de la phosphorylation qui façonnent l’homéostasie cellulaire. Une expression altérée d’EYA4 ou une perturbation génomique est associée à des phénotypes sensoriels et cardiaques et a également été rapportée dans des études de silençage épigénétique associé aux tumeurs, ce qui étaye sa pertinence pour des investigations mécanistiques dans des modèles de maladies humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EYA4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EYA4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EYA4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EYA4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EYA4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EYA4 pour l'étude de la signalisation de EYA4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EYA4 essentiels à la fonction de EYA4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EYA4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EYA4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EYA4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EYA4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EYA4 plasmide HDR (h) et le EYA4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EYA4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EYA4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.