Plasmide CRISPR d'Activation (h) EY-cadherin: sc-401988-ACT

CDH18 code l’EY-cadhérine, une molécule d’adhérence cellule–cellule dépendante du calcium appartenant à la superfamille des cadhérines, qui soutient l’architecture tissulaire en favorisant la formation des jonctions d’adhérence et un tri cellulaire coordonné. Grâce à son association aux caténines et au cytosquelette d’actine, l’EY-cadhérine peut influencer l’inhibition de contact, des programmes de cohésion de type épithélial et des réseaux de signalisation qui s’entrecroisent avec la dynamique de la β-caténine et d’autres régulateurs jonctionnels. Une expression altérée ou une adhérence médiée par les cadhérines dérégulée est associée à des modifications de la migration cellulaire, de l’état de différenciation et du comportement invasif observées dans de nombreux contextes pathologiques. Par conséquent, CDH18 est fréquemment étudié dans des modèles portant sur la signalisation dépendante de l’adhérence, la morphogenèse et les transitions d’identité cellulaire.

EY-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDH18 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EY-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDH18 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDH18, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EY-cadherin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDH18 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EY-cadherin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EY-cadherin dans les cellules tumorales présentant une expression de CDH18 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.