Particules Lentivirales d'Activation (h2) EXTL1: sc-409470-LAC-2

Chez l’humain, le gène EXTL1 code l’exostosine-like glycosyltransférase 1, une enzyme associée à l’appareil de Golgi impliquée dans la biosynthèse et l’élongation des chaînes de sulfate d’héparane portées par les protéoglycanes, contribuant ainsi à façonner la composition de la matrice extracellulaire et la fonction de co-récepteurs à la surface cellulaire. Par son rôle dans l’assemblage du sulfate d’héparane, EXTL1 influence des réseaux de signalisation clés tels que les voies FGF, WNT et Hedgehog, qui dépendent de la distribution des ligands médiée par les glycosaminoglycanes et de l’engagement des récepteurs. Une dérégulation du métabolisme du sulfate d’héparane, notamment via une activité modifiée d’EXTL1, a été associée à des perturbations des processus de développement ainsi qu’à des maladies impliquant une communication cellulaire aberrante et un remodelage de la matrice. L’édition du gène EXTL1 ou la perturbation de sa fonction permet d’appuyer des études mécanistiques sur la signalisation dépendante de la glycosylation, la biologie des protéoglycanes et des lectures spécifiques de voies dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales EXTL1 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de EXTL1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales EXTL1 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription EXTL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de EXTL1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif EXTL1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.