Plasmide CRISPR d'Activation (h) EXT1: sc-404635-ACT

Le gène humain **EXT1** code l’exostosine-1, une glycosyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui forme un complexe fonctionnel avec **EXT2** afin de catalyser l’élongation des chaînes de **sulfate d’héparane** sur les protéoglycanes. En contrôlant la biosynthèse du sulfate d’héparane, EXT1 façonne l’organisation de la matrice extracellulaire et module la disponibilité des ligands pour des voies de signalisation clés, notamment **FGF**, **WNT**, **Hedgehog** et **BMP**, influençant l’adhésion et la migration cellulaires ainsi que la mise en place des patrons du développement. La perturbation ou la dérégulation d’EXT1 modifie la composition des protéoglycanes et les gradients de signalisation, et est fortement associée à des dysplasies squelettiques telles que les **ostéochondromes multiples**, ainsi qu’à des défauts plus larges de morphogenèse tissulaire. L’activité d’EXT1 est également pertinente pour les études du remodelage du microenvironnement tumoral et des interactions récepteur–ligand qui dépendent de la présentation du sulfate d’héparane.

EXT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EXT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EXT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EXT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EXT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EXT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EXT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EXT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EXT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de EXT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.