Plasmide CRISPR d'Activation (h) Exportin 7: sc-405335-ACT

XPO7 code l’exportine 7, un récepteur d’export nucléaire de la famille des karyophérines-β qui assure un transport, dépendant de RanGTP, de cargos protéiques du noyau vers le cytoplasme. L’exportine 7 contribue au trafic nucléocytoplasmique et à la protéostasie en contrôlant la localisation subcellulaire de facteurs impliqués dans la régulation transcriptionnelle, les réponses au stress et les processus associés au cycle cellulaire. Une dérégulation des voies de transport nucléaire peut modifier les programmes d’expression génique et la dynamique des signalisations, faisant de XPO7 un nœud pertinent pour étudier les mécanismes reliant des défauts de transport à la biologie du cancer et à d’autres troubles caractérisés par une compartimentation nucléocytoplasmique altérée. L’étude fonctionnelle de XPO7 soutient la recherche sur la sélectivité de l’export nucléaire, les interactions entre voies avec les réseaux ubiquitine–protéasome et de signalisation du stress, ainsi que les dépendances spécifiques au contexte dans les cellules en prolifération.

Exportin 7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de XPO7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Exportin 7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus XPO7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription XPO7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Exportin 7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus XPO7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Exportin 7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Exportin 7 dans les cellules tumorales présentant une expression de XPO7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.