Plasmide Double Nickase (h) Exportin 5: sc-403402-NIC

XPO5 code pour l’exportine 5, un récepteur d’export nucléaire dépendant de RanGTP qui transporte les pré-miARN et d’autres ARN structurés du noyau vers le cytoplasme, permettant leur traitement par Dicer et la biogenèse des microARN matures. En contrôlant la disponibilité des précurseurs de miARN, l’exportine 5 influence des programmes de régulation génique post‑transcriptionnelle liés au contrôle du cycle cellulaire, à la différenciation et aux réponses au stress. La fonction de XPO5 s’articule avec les voies d’interférence ARN ainsi qu’avec des processus plus larges de transport nucléocytoplasmique coordonnés par le système Ran. Une dérégulation de l’export dépendant de XPO5 a été associée à des profils de miARN altérés observés dans de multiples contextes pertinents pour les maladies, ce qui motive son étude dans les mécanismes de contrôle de l’expression génique.

Exportin 5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus XPO5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de XPO5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de XPO5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de XPO5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.