Plasmide Double Nickase (h) Ets-2: sc-416381-NIC

ETS2 code Ets-2, un membre de la famille ETS de facteurs de transcription spécifiques de séquence, qui se lie aux motifs GGAA/T pour réguler des programmes d’expression génique contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et la survie. L’activité d’Ets-2 est modulée par une phosphorylation dépendante de MAPK/ERK et intègre des signaux en aval des voies des facteurs de croissance et des cytokines afin de façonner les réponses transcriptionnelles dans divers types cellulaires. Par la régulation de gènes impliqués dans le remodelage de la matrice extracellulaire, la signalisation inflammatoire et la prolifération, ETS2 a été impliqué dans des réseaux oncogéniques et suppresseurs de tumeur dépendants du contexte, ainsi que dans des phénotypes immunitaires et développementaux. Des altérations de la dose d’ETS2 ou de l’activation des voies associées ont été reliées à des cancers et à la biologie liée au chromosome 21, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la régulation transcriptionnelle et des interactions entre voies de signalisation.

Ets-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ETS2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ETS2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ETS2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ETS2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.