Plasmide Double Nickase (m) Ets-1: sc-423870-NIC

Ets1 code le facteur de transcription Ets-1 de la famille ETS, un régulateur se liant à l’ADN qui intègre des signaux de signalisation pour contrôler des programmes géniques impliqués dans la différenciation, la prolifération et la migration cellulaires. Dans les cellules de souris, Ets-1 est particulièrement associé au développement et à l’activation des cellules immunitaires, en modulant les sorties transcriptionnelles en aval de voies telles que MAPK/ERK et la signalisation induite par les cytokines. Ets-1 module l’expression de gènes impliqués dans le remodelage de la matrice extracellulaire, l’adhésion et les médiateurs inflammatoires, ce qui le relie aux processus de remodelage tissulaire. Une activité d’ETS1 dérégulée a été associée à des réponses immunitaires altérées et à des réseaux transcriptionnels oncogéniques dans de multiples contextes expérimentaux, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la régulation génique.

Ets-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ets1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ets1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ets1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ets1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.