Particules Lentivirales d'Activation (m) ETBR: sc-420112-LAC

Le gène murin **Ednrb** code le récepteur de l’endothéline de type B (ETBR), un RCPG de classe A qui se lie aux peptides endothéline afin de réguler la signalisation vasomotrice, le développement des lignages dérivés de la crête neurale, ainsi que la maturation des mélanocytes et du système nerveux entérique. ETBR se couple principalement à des protéines G qui activent la signalisation PLC/IP3–Ca2+, des cascades MAPK et des voies liées à l’oxyde nitrique, modulant de manière dépendante du contexte la migration, la prolifération et la différenciation cellulaires. L’activité d’Ednrb est étroitement associée aux processus de mise en place des patrons tissulaires et à la biologie des cellules pigmentaires, et une perturbation de la signalisation de l’endothéline via ETBR est liée à des défauts d’innervation entérique et de fonction des mélanocytes. Ainsi, **Ednrb** est largement utilisé comme nœud mécanistique pour étudier la dynamique de la signalisation des RCPG, le développement de la crête neurale et les programmes transcriptionnels spécifiques de certains types cellulaires dans des modèles murins.

Les particules d'activation lentivirales ETBR (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Ednrb dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ETBR (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Ednrb, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ETBR. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Ednrb ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.