Plasmide Double Nickase (r) Estrogen Receptor beta: sc-437278-NIC

Le récepteur des œstrogènes bêta (ERβ), codé par le gène *Esr2* chez le rat, est un récepteur nucléaire activé par un ligand qui régule des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération cellulaire, la différenciation et l’homéostasie métabolique. Après liaison aux œstrogènes, ERβ se fixe sur des éléments de réponse aux œstrogènes et coopère avec des corégulateurs afin de moduler les interactions avec les voies de signalisation MAPK/ERK, PI3K/AKT et inflammatoires. L’activité d’ERβ influence la physiologie du tractus reproducteur, le remodelage osseux, la fonction vasculaire et des processus du système nerveux central, notamment la plasticité synaptique. Une signalisation d’ERβ dérégulée a été impliquée dans des phénotypes hormono‑dépendants ainsi que, dans des modèles de recherche, dans la perturbation endocrinienne, l’inflammation, la fibrose et des voies liées à la carcinogenèse.

Estrogen Receptor beta Le plasmide double nickase (r) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de . Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de . En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de .

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.