Plasmide CRISPR d'Activation (r) Estrogen Receptor beta: sc-437278-ACT

Le récepteur des œstrogènes bêta (ERβ), codé par le gène Esr2 chez le rat, est un récepteur nucléaire activé par un ligand qui agit comme facteur de transcription pour réguler des réseaux de gènes sensibles aux œstrogènes. Après liaison de l’hormone, ERβ module la chromatine et recrute des co‑régulateurs afin de contrôler des programmes impliqués dans la prolifération cellulaire, la différenciation, l’apoptose et l’homéostasie métabolique. La signalisation d’ERβ s’entrecroise avec les voies PI3K/AKT, MAPK/ERK et inflammatoires, façonnant des réponses spécifiques aux tissus dans les organes reproducteurs, le cerveau, l’os et le système cardiovasculaire. Une activité d’ERβ dérégulée et une altération de l’équilibre de la signalisation œstrogénique ont été impliquées dans la biologie des tumeurs hormono‑dépendantes, la neuroinflammation et les dysfonctionnements métaboliques, faisant d’Esr2 une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles de rat.

Estrogen Receptor beta Le plasmide d'activation CRISPR (r) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Estrogen Receptor beta Le plasmide d'activation CRISPR (r) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription , où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Estrogen Receptor beta. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Estrogen Receptor beta au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Estrogen Receptor beta dans les cellules tumorales présentant une expression de silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.