Plasmide CRISPR d'Activation (m) Estrogen Receptor beta: sc-420232-ACT

Esr2 code le récepteur des œstrogènes bêta (ERβ), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui se lie aux éléments de réponse aux œstrogènes et coordonne des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération cellulaire, la différenciation et l’homéostasie métabolique dans de nombreux tissus. Chez la souris, ERβ module les interactions entre la signalisation œstrogénique, les voies MAPK/ERK et PI3K/AKT, et interagit avec des co‑régulateurs afin de façonner l’accessibilité de la chromatine et la dynamique d’expression génique. L’activité d’Esr2 est largement étudiée dans la biologie de l’appareil reproducteur, le développement de la glande mammaire, le remodelage osseux, la régulation immunitaire et la neurobiologie, où elle peut contrebalancer la signalisation dépendante d’ERα. Une signalisation d’ERβ dérégulée ou une expression altérée du récepteur est associée à des phénotypes liés au système endocrinien et fait fréquemment l’objet d’analyses dans des modèles des mécanismes de maladies hormono‑dépendantes et du remodelage transcriptionnel lié à l’inflammation.

Estrogen Receptor beta Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Esr2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Estrogen Receptor beta Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Esr2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Esr2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Estrogen Receptor beta. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Esr2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Estrogen Receptor beta au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Estrogen Receptor beta dans les cellules tumorales présentant une expression de Esr2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.