Estrogen Receptor alpha Lentiviral Activation Particles (m): sc-418925-LAC

Das murine Esr1-Gen kodiert den Östrogenrezeptor alpha (ERα), einen ligandaktivierten nukleären Rezeptor, der als Transkriptionsfaktor fungiert und die Östrogensignalgebung mit umfassenden Programmen der Zellidentität, Proliferation und Differenzierung verknüpft. Nach Aktivierung bindet ERα an Östrogen-Response-Elemente und kooperiert mit Kofaktoren, um die Chromatinzugänglichkeit und Transkription zu regulieren; zudem vermittelt er schnelle, nicht-genomische Signalwege über die MAPK- und PI3K/AKT-Kaskaden. Die ERα-Aktivität überschneidet sich mit Zytokin- und Wachstumsfaktorsignalgebung und beeinflusst dadurch Stoffwechsel, Polarisation von Immunzellen und Gewebeumbau in reproduktiven und nicht reproduktiven Organen. Eine fehlregulierte ERα-Signalgebung ist ein zentrales Forschungsthema in der hormonresponsiven Biologie sowie bei Mechanismen der endokrinen Disruption, des entzündungsassoziierten Gewebeumbaus und onkogener transkriptioneller Netzwerke.

Estrogen Receptor alpha Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Esr1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Estrogen Receptor alpha Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Esr1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Estrogen Receptor alpha-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Esr1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.