Plasmide Double Nickase (h) Estrogen Receptor alpha: sc-400011-NIC

ESR1 code le récepteur des œstrogènes alpha (ERα), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui agit comme facteur de transcription en coordonnant des programmes géniques sensibles aux œstrogènes. Après liaison de l’hormone, ERα se fixe aux éléments de réponse aux œstrogènes et recrute des complexes de corégulateurs afin de moduler l’accessibilité de la chromatine et la transcription, en intégrant des signaux issus des réseaux PI3K/AKT, MAPK/ERK et de la régulation du cycle cellulaire. L’activité d’ERα façonne la prolifération cellulaire, la différenciation et l’homéostasie métabolique dans de nombreux tissus, et des altérations de la régulation d’ESR1 ou des formes variantes sont fréquemment étudiées dans la biologie des tumeurs hormono-sensibles et les dysrégulations de la signalisation endocrinienne. Comme la transcription dépendante d’ERα interfère avec le contrôle épigénétique et le dialogue entre récepteurs, ESR1 constitue une cible centrale pour analyser la signalisation des récepteurs stéroïdiens et l’architecture des réseaux transcriptionnels.

Estrogen Receptor alpha Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ESR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ESR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ESR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ESR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.