Plasmide CRISPR/Cas9 KO ERRγ (h): sc-416300

Présentation

ESRRG code le récepteur gamma apparenté aux récepteurs des œstrogènes (ERRγ), un récepteur nucléaire orphelin qui agit comme facteur de transcription indépendant des ligands, régulant la biogenèse mitochondriale, la phosphorylation oxydative et l’homéostasie énergétique cellulaire. ERRγ coopère avec les coactivateurs PGC-1 pour contrôler des programmes d’expression génique impliqués dans l’oxydation des acides gras, l’activité du cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs) et l’assemblage de la chaîne respiratoire, reliant le contrôle transcriptionnel à l’adaptation métabolique. Il participe également à des programmes de différenciation spécifiques des tissus, notamment dans les contextes cardiaque et neuronal, et module des réseaux de signalisation endocriniens et sensibles au stress. Une activité d’ESRRG/ERRγ dérégulée a été associée à un remodelage métabolique et à des états bioénergétiques altérés observés dans plusieurs modèles pertinents pour les maladies, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique dans des études de biologie des systèmes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ERRγ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ESRRG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ESRRG, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ESRRG à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ERRγ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ESRRG pour l'étude de la signalisation de ERRγ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ESRRG essentiels à la fonction de ERRγ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ESRRG pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ERRγ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ERRγ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ESRRG. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ERRγ plasmide HDR (h) et le ERRγ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ESRRG pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ESRRG définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.