Plasmide CRISPR d'Activation (h) ERRβ: sc-402868-ACT

ESRRB code pour le récepteur apparenté aux œstrogènes bêta (ERRβ), un facteur de transcription appartenant à la famille des récepteurs nucléaires orphelins, qui régule des programmes géniques contrôlant l’homéostasie énergétique cellulaire, la biogenèse mitochondriale et le métabolisme oxydatif. ERRβ se fixe à des éléments de réponse spécifiques de l’ADN et interagit avec des co‑régulateurs afin de moduler des réseaux transcriptionnels liés à la différenciation et au maintien de l’état cellulaire. Dans les cellules humaines, l’activité d’ESRRB s’inscrit à l’interface de la signalisation des récepteurs nucléaires et des voies métaboliques, influençant des processus tels que la prolifération, l’adaptation au stress et la spécification de lignage. Une dérégulation du contrôle transcriptionnel associé à ERRβ a été étudiée dans des contextes incluant des troubles du développement et le remodelage métabolique impliqué dans le cancer.

ERRβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ESRRB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ERRβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ESRRB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ESRRB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ERRβ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ESRRB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ERRβ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ERRβ dans les cellules tumorales présentant une expression de ESRRB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.