Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
ERGIC-53 Double Nickase Plasmid (h): sc-401602-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ERGIC-53 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ERGIC-53 Double-Nickase-Plasmid (h) und ERGIC-53 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LMAN1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ERGIC-53: sc-398777
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ERGIC-53 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401602-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ERGIC-53 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401602-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LMAN1 kodiert ERGIC-53, ein mannose-spezifisches Lektin, das zwischen dem endoplasmatischen Retikulum (ER), dem ER–Golgi-Zwischenkompartiment (ERGIC) und dem cis-Golgi zyklisch hin- und herwechselt, um den Transport ausgewählter Glycoprotein-Fracht zu fördern. Als Bestandteil des frühen sekretorischen Weges arbeitet ERGIC-53 mit dem Kofaktor MCFD2 zusammen, um den ER-Austritt und die Qualitätskontrolle korrekt gefalteter Proteine zu unterstützen, und verknüpft dabei die lektinvermittelte Frachtbindung mit dem COPII-abhängigen Transport. Eine Störung der LMAN1-abhängigen Sortierung kann die Proteinsekretion und die ER-Homöostase beeinträchtigen und ist damit relevant für Studien zur Proteostase, zum glykosylierungsabhängigen Transport und zu Stressantworten des sekretorischen Weges. Beim Menschen sind Loss-of-function-Varianten in LMAN1 mit einem kombinierten Mangel der Gerinnungsfaktoren V und VIII assoziiert; dies liefert einen genetischen Rahmen, um frachtspezifische Sekretionsmechanismen zu untersuchen, ohne dabei eine klinische Anwendung zu implizieren.
ERGIC-53 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LMAN1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LMAN1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LMAN1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LMAN1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.