Plasmide CRISPR d'Activation (m) Erg: sc-420226-ACT

Erg de souris code un facteur de transcription de la famille ETS qui se lie à des motifs cœur GGAA/T afin de réguler des programmes géniques contrôlant la spécification endothéliale, la stabilité vasculaire et le maintien des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques. Erg intègre des signaux issus de voies angiogéniques et sensibles aux cytokines, notamment des réseaux transcriptionnels endothéliaux pilotés par le VEGF et une régulation de la sortie transcriptionnelle liée aux voies MAPK/PI3K. L’activité d’ERG dérégulée est largement étudiée dans les circuits transcriptionnels oncogéniques, en particulier dans les hémopathies malignes et dans des contextes de fusions dépendantes des ETS, où l’expression altérée des gènes cibles affecte la prolifération, la différenciation et l’identité cellulaire. Dans les systèmes murins, Erg est fréquemment utilisé pour modéliser l’engagement de lignée, la biologie vasculaire et la dépendance aux facteurs de transcription dans le développement normal et dans des états cellulaires pertinents pour la maladie.

Erg Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Erg sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Erg Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Erg dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Erg, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Erg. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Erg natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Erg au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Erg dans les cellules tumorales présentant une expression de Erg silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.