Plasmide Double Nickase (h) eRF3a: sc-404748-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) eRF3a correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide eRF3a Double Nickase (h) et le plasmide eRF3a Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GSPT1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) eRF3a | sc-404748-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) eRF3a | sc-404748-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **GSPT1** code **eRF3a**, un facteur de terminaison de la traduction qui forme un complexe fonctionnel avec **eRF1** afin de favoriser, de manière dépendante du GTP, la libération du peptide aux codons stop et de coordonner le recyclage des ribosomes. Au-delà de la terminaison, eRF3a participe à des voies de surveillance des ARNm telles que la dégradation des ARNm médiée par les codons stop prématurés (NMD) et influence la protéostasie en reliant la dynamique de traduction au contrôle qualité des protéines. L’activité de GSPT1 s’intègre à la régulation du cycle cellulaire et à des programmes de traduction sensibles au stress, et une expression altérée a été associée à des phénotypes prolifératifs dans plusieurs contextes pertinents en oncologie. En tant que nœud central de la fidélité de traduction et du renouvellement des ARNm, eRF3a est fréquemment étudié pour analyser les mécanismes de reconnaissance des codons stop, la stabilité des transcrits et le contrôle de la croissance.
eRF3a Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GSPT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GSPT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GSPT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GSPT1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.