Plasmide CRISPR/Cas9 KO eRF3a (h): sc-404748

Présentation

GSPT1 code le facteur eucaryote de libération 3a (eRF3a), une GTPase associée au ribosome qui s’associe à eRF1 pour assurer la terminaison de la traduction et favoriser le recyclage des ribosomes après reconnaissance d’un codon stop. Grâce à une hydrolyse du GTP régulée et à des interactions avec la protéine de liaison à la poly(A) et d’autres facteurs de traduction, eRF3a contribue à coordonner la surveillance des ARNm, la protéostasie et la fidélité de la synthèse protéique. Une régulation altérée de la terminaison de la traduction et des voies de contrôle qualité de l’ARN a été associée à une dérégulation des programmes de croissance cellulaire et des réponses au stress, faisant de GSPT1 un nœud pertinent pour étudier l’interface entre le contrôle traductionnel et les réseaux de signalisation et d’homéostasie. En recherche biomédicale, la perturbation d’eRF3a peut être exploitée pour explorer les mécanismes de lecture au-delà des codons stop (readthrough), le couplage avec la dégradation médiée par les codons non-sens (NMD) et les vulnérabilités qui apparaissent lorsque le maintien du protéome est compromis.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO eRF3a (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GSPT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GSPT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GSPT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine eRF3a.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GSPT1 pour l'étude de la signalisation de eRF3a, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GSPT1 essentiels à la fonction de eRF3a
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GSPT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le eRF3a plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le eRF3a plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GSPT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le eRF3a plasmide HDR (h) et le eRF3a (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GSPT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GSPT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.