Plasmide Double Nickase (h) eRF1: sc-405156-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) eRF1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide eRF1 Double Nickase (h) et le plasmide eRF1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ETF1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: eRF1 Antibody (B-11): sc-365686
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) eRF1 | sc-405156-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) eRF1 | sc-405156-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ETF1 humain code le facteur de terminaison eucaryote 1 (eRF1), un facteur essentiel de terminaison de la traduction qui reconnaît les trois codons stop et favorise l’hydrolyse du peptidyl-ARNt au site A du ribosome, en collaboration avec eRF3/GSPT1. Par son rôle central dans la protéostasie, eRF1 contribue à maintenir la fidélité de la traduction des ARNm et à limiter le translecture (readthrough) des codons stop, reliant l’activité d’ETF1 au contrôle qualité du ribosome et à des voies de surveillance telles que la dégradation des ARNm médiée par les codons non-sens (nonsense-mediated mRNA decay). Une perturbation de la terminaison de la traduction peut remodeler la signalisation de réponse au stress, la charge de repliement des protéines et les programmes globaux d’expression génique impliqués dans l’homéostasie cellulaire. ETF1 présente donc un intérêt pour l’étude du contrôle traductionnel, de la reconnaissance des codons et des mécanismes qui couplent la dynamique ribosomique à des déséquilibres du protéome associés aux maladies.
eRF1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ETF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ETF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ETF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ETF1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.