ERdj3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404935
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ERdj3 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ERdj3, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ERdj3 Anticuerpo (C-7): sc-271240
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ERdj3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404935 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
DNAJB11 codifica ERdj3, una cocaperona Hsp40 luminal del RE que se asocia con BiP/HSPA5 para favorecer el plegamiento de proteínas secretoras y de membrana recién sintetizadas y limitar su agregación. ERdj3 participa en la proteostasis del retículo endoplásmico al estimular la actividad ATPasa de BiP, coordinar decisiones de control de calidad vinculadas a la degradación asociada al RE (ERAD) y modular la señalización de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) durante el estrés del RE. A través de estas funciones, DNAJB11 influye en la eficiencia de la vía secretora y en la adaptación celular a la carga de proteínas mal plegadas, procesos implicados en trastornos caracterizados por desequilibrios de proteostasis, incluida la fisiopatología renal y hepática, así como respuestas al estrés asociadas al cáncer. Su papel en las redes de chaperonas lo hace relevante para estudiar cómo el estrés del RE se integra con la apoptosis, la inflamación y la remodelación metabólica.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ERdj3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DNAJB11 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DNAJB11 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DNAJB11 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ERdj3.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DNAJB11 para la investigación de la señalización de ERdj3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de DNAJB11 críticos para la función de ERdj3
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DNAJB11 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ERdj3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ERdj3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DNAJB11. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ERdj3 (h) y el plásmido HDR ERdj3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DNAJB11 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DNAJB11 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.