Plasmide Double Nickase (h) ERCC1: sc-400630-NIC

ERCC1 code une endonucléase spécifique de la structure qui forme un hétérodimère avec XPF (ERCC4) afin d’effectuer l’incision 5′ lors de la réparation par excision de nucléotides, et de traiter les pontages interbrins de l’ADN ainsi que les intermédiaires de réplication bloqués. Ce complexe intervient dans des voies de maintien du génome qui résolvent les lésions déformant l’hélice et coordonnent la réparation avec la réplication, limitant ainsi l’accumulation de dommages à l’ADN et d’aberrations chromosomiques. L’activité d’ERCC1 est étroitement liée aux réponses cellulaires aux photoproduits induits par les UV et à divers adduits volumineux, avec des effets en aval sur la progression du cycle cellulaire et la signalisation de l’apoptose. Une capacité de réparation médiée par ERCC1 dérégulée a été associée à des phénotypes de stabilité génomique modifiés et est fréquemment examinée dans les études des réseaux de réponse aux dommages de l’ADN et des processus mutationnels.

ERCC1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ERCC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ERCC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ERCC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ERCC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.