ErbB3/HER3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420219
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- ErbB3/HER3 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im ErbB3/HER3-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ErbB3/HER3: sc-7390
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ErbB3/HER3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-420219 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Erbb3 kodiert die Rezeptor-Tyrosinkinase ErbB3/HER3, ein Mitglied der EGFR/ErbB-Familie, das bevorzugt Heterodimere mit ERBB2 bildet, um Wachstumsfaktorsignale zu übertragen. Trotz begrenzter intrinsischer Kinaseaktivität stellt ErbB3 mehrere Andockstellen für PI3K bereit und koppelt Ligandenstimulation stark an die PI3K–AKT-Signalübertragung, mit zusätzlichem Crosstalk in MAPK/ERK- und mTOR-regulierte Prozesse. In Mauszellen trägt ErbB3 zu Programmen der Entwicklung und Gewebehomöostase bei und beeinflusst über Rezeptor-Trafficking und Feedback-Regulation die epitheliale Differenzierung, das Überleben und die Migration. Eine fehlregulierte ERBB-Signalgebung unter Beteiligung von HER3 wird häufig im Kontext onkogener Umstrukturierungen von Rezeptornetzwerken und resistenzähnlicher Signalanpassungen untersucht, weshalb Erbb3 ein häufiger Knotenpunkt für die Analyse von Signalwegen ist.
Das ErbB3/HER3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Erbb3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Erbb3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Erbb3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ErbB3/HER3-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Erbb3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ErbB3/HER3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Erbb3-Exone abzielen, die für die ErbB3/HER3-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Erbb3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom ErbB3/HER3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ErbB3/HER3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Erbb3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ErbB3/HER3 HDR-Plasmid (m) und ErbB3/HER3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Erbb3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Erbb3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.