Plasmide CRISPR/Cas9 KO ErbB3/HER3 (m): sc-420219

Présentation

Erbb3 code le récepteur tyrosine kinase ErbB3/HER3, membre de la famille EGFR/ErbB, qui forme préférentiellement des hétérodimères avec ERBB2 pour transmettre les signaux des facteurs de croissance. Malgré une activité kinase intrinsèque limitée, ErbB3 offre de multiples sites d’ancrage pour la PI3K et couple fortement la stimulation par le ligand à la signalisation PI3K–AKT, avec des interactions supplémentaires avec les processus régulés par MAPK/ERK et mTOR. Dans les cellules de souris, ErbB3 contribue aux programmes de développement et d’homéostasie tissulaire, en influençant la différenciation épithéliale, la survie et la migration via le trafic des récepteurs et la régulation par rétroaction. Une signalisation ERBB dérégulée impliquant HER3 est fréquemment étudiée dans des contextes de remodelage oncogénique des réseaux de récepteurs et d’adaptations de signalisation de type résistance, faisant d’Erbb3 un nœud courant pour l’analyse des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ErbB3/HER3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Erbb3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Erbb3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Erbb3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ErbB3/HER3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Erbb3 pour l'étude de la signalisation de ErbB3/HER3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Erbb3 essentiels à la fonction de ErbB3/HER3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Erbb3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ErbB3/HER3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ErbB3/HER3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Erbb3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ErbB3/HER3 plasmide HDR (m) et le ErbB3/HER3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Erbb3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Erbb3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.