Plasmide CRISPR d'Activation (h) ErbB3/HER3: sc-400146-ACT

ERBB3 code ErbB3/HER3, un membre de la famille des récepteurs tyrosine kinases ERBB qui agit principalement comme co‑récepteur à activité kinase déficiente. Après liaison d’un ligand (p. ex. les neurégulines), ErbB3 forme des hétérodimères avec ERBB2/HER2 et d’autres récepteurs ERBB afin d’initier la signalisation via PI3K–AKT, MAPK/ERK et d’autres voies associées à la croissance et à la survie. Sa queue cytoplasmique contient plusieurs sites d’ancrage pour PI3K, permettant un couplage puissant à la signalisation en aval malgré une activité catalytique intrinsèque limitée. Une expression ou une signalisation d’ERBB3 dérégulée est impliquée dans le remodelage des réseaux oncogéniques, des phénotypes associés aux métastases et des mécanismes de résistance dans de multiples contextes tumoraux.

ErbB3/HER3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ERBB3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ErbB3/HER3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ERBB3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ERBB3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ErbB3/HER3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ERBB3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ErbB3/HER3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ErbB3/HER3 dans les cellules tumorales présentant une expression de ERBB3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.