Plasmide Double Nickase (m) ErbB2/HER2: sc-420218-NIC

Erbb2 code pour le récepteur tyrosine kinase ErbB2/HER2, un membre de la famille EGFR/ErbB qui sert de partenaire privilégié d’hétérodimérisation afin d’amplifier la signalisation induite par les ligands. Une fois activé, ErbB2 recrute les cascades PI3K–AKT–mTOR et RAS–RAF–MEK–ERK pour réguler la prolifération, la survie, le métabolisme et la différenciation, avec des rôles supplémentaires dans la polarité épithéliale et le développement de la glande mammaire. Une signalisation ErbB2 dérégulée est associée à la transformation oncogénique et à une altération du contrôle du cycle cellulaire, faisant d’Erbb2 un nœud largement utilisé pour étudier le dialogue entre récepteurs et l’intégration des signaux. Les modèles murins Erbb2 sont également utilisés pour examiner des phénotypes dépendants des voies de signalisation dans des contextes de développement et de maladies.

ErbB2/HER2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Erbb2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Erbb2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Erbb2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Erbb2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.