Plasmide Double Nickase (h) ErbB2/HER2: sc-400138-NIC

ERBB2 code pour la tyrosine kinase réceptrice ErbB2/HER2, un membre de la famille EGFR/ErbB qui agit comme partenaire de choix pour l'hétérodimérisation, amplifiant ainsi la signalisation induite par les facteurs de croissance. Une fois activé, HER2 stimule les voies MAPK/ERK et PI3K–AKT–mTOR en aval, qui régulent la prolifération, la survie, le métabolisme et la progression du cycle cellulaire. La dérégulation d'ERBB2 est fortement associée à une altération du trafic des récepteurs, à une signalisation mitogène soutenue et à des modifications des programmes de différenciation épithéliale. Par conséquent, ERBB2 constitue un nœud moléculaire largement utilisé pour étudier les réseaux de signalisation oncogénique, la communication croisée entre récepteurs et le remaniement des voies dans des modèles cellulaires humains.

ErbB2/HER2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ERBB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ERBB2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ERBB2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ERBB2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.