Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ERAP1 Double Nickase Plasmid (m): sc-429840-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ERAP1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ERAP1 Double-Nickase-Plasmid (m) und ERAP1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Erap1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ERAP1: sc-271823
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ERAP1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-429840-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ERAP1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-429840-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Die murine ERAP1 (Erap1) ist eine im endoplasmatischen Retikulum (ER) lokalisierte Zink-Metallopeptidase, die antigene Peptidvorläufer auf optimale Längen für die Beladung von MHC‑Klasse‑I‑Molekülen zuschneidet und dadurch das Immunopeptidom sowie die Erkennung durch CD8+‑T‑Zellen mitprägt. Über die Antigenprozessierung hinaus trägt ERAP1 zur Qualitätskontrolle von ER-Proteinen bei und kann über ihre Funktionen in der Peptidverarbeitung und Proteostase auch ER‑Stressantworten beeinflussen. Unterschiede in der ERAP1‑Aktivität wurden mit Immundysregulation und entzündlichen Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch Erap1 ein nützliches Ziel für die Untersuchung von Antigenpräsentationswegen und Immun-Signalnetzwerken darstellt. In Mausmodellen unterstützt eine Störung von Erap1 mechanistische Forschung zu autoimmunitäts- und infektionsrelevanten Prozessen, ohne klinische Aussagen zu implizieren.
ERAP1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Erap1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Erap1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Erap1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Erap1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.