Plasmide Double Nickase (h) ER81: sc-401594-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ER81 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ER81 Double Nickase (h) et le plasmide ER81 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ETV1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ER81 | sc-401594-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ER81 | sc-401594-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ETV1 code le facteur de transcription de la famille ETS ER81, une protéine se liant à l’ADN de manière spécifique de la séquence, qui coordonne des programmes d’expression génique contrôlant les décisions de destinée cellulaire, la prolifération et la différenciation. ER81 intègre des signaux issus des voies MAPK/ERK et des récepteurs à activité tyrosine kinase afin de moduler des sorties transcriptionnelles impliquées dans le développement neuronal et la mise en place des patrons tissulaires. Une activité dérégulée d’ETV1 a été associée à des réseaux transcriptionnels oncogéniques, notamment via des fusions géniques et une expression aberrante pilotée par des enhancers dans de multiples contextes tumoraux, ce qui en fait un modèle largement utilisé pour étudier les programmes de lignée et la transcription dépendante des voies de signalisation. Dans les cellules humaines, la régulation des cibles d’ER81 fournit un système expérimental maniable pour étudier la sélection promoteur/enhancer médiée par les ETS, le recrutement de cofacteurs et le contrôle transcriptionnel dépendant de la chromatine.
ER81 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ETV1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ETV1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ETV1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ETV1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.