Plasmide Double Nickase (h) EpoR: sc-400442-NIC

EPOR code le récepteur de l'érythropoïétine (EpoR), un récepteur de cytokines de type I qui régit la survie, la prolifération et la différenciation des progéniteurs érythroïdes en réponse à l'érythropoïétine. La dimérisation du récepteur induite par le ligand active JAK2 ainsi que les voies de signalisation en aval STAT5, PI3K–AKT et RAS–MAPK, coordonnant des programmes transcriptionnels qui soutiennent l'érythropoïèse et les réponses cellulaires au stress. Une signalisation d'EPOR dérégulée a été associée à des modifications de la production de globules rouges et à des signaux de croissance aberrants dans des contextes hématologiques et autres, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la biologie des récepteurs aux cytokines. EPOR est également utilisé comme récepteur modèle pour disséquer le trafic des récepteurs, l'atténuation du signal et les interactions (cross-talk) avec les voies liées à l'hypoxie et à l'homéostasie du fer.

EpoR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EPOR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EPOR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EPOR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EPOR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.