Plasmide CRISPR d'Activation (h) Epiregulin: sc-404273-ACT

EREG code pour l’épireguline, un ligand sécrété de la famille EGFR/ERBB qui module, de manière dépendante du contexte, la signalisation épithéliale et stromale. En se liant à EGFR et à ERBB4, l’épireguline active en aval les cascades de signalisation MAPK/ERK, PI3K–AKT et JAK/STAT, qui régulent la prolifération, la différenciation, la migration et le dialogue inflammatoire. L’expression d’EREG est fréquemment inductible par des cytokines et des facteurs de croissance, et contribue aux programmes de réparation des plaies, au remodelage tissulaire et à la communication paracrine au sein du microenvironnement tumoral. Une dérégulation d’EREG a été associée à une signalisation oncogénique, à des phénotypes invasifs et à des interactions immuno‑épithéliales altérées, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent en biologie du cancer et en recherche sur l’inflammation.

Epiregulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EREG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Epiregulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EREG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EREG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Epiregulin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EREG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Epiregulin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Epiregulin dans les cellules tumorales présentant une expression de EREG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.