Epidermis-type 12-LO CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419088

Übersicht

Alox12b kodiert die epidermale 12‑Lipoxygenase (12‑LO), eine nicht‑hämhaltige, eisenabhängige Dioxygenase, die veresterte mehrfach ungesättigte Fettsäuren oxidiert und dadurch Hydroperoxid‑Lipidzwischenprodukte erzeugt. In der Maus-Epidermis wirkt ALOX12B im Lipoxygenase‑Stoffwechselweg, der die Verarbeitung von Acylceramiden und die Ausbildung der Lipidbarriere des Stratum corneum unterstützt, und koordiniert dabei die terminale Keratinozytendifferenzierung und Kornifizierung. Eine veränderte 12‑LO‑Aktivität beeinflusst die epidermale Lipidhomöostase, oxidatives Lipidsignaling und die Barriereintegrität – Prozesse, die häufig in Modellen ichthyoseähnlicher Phänotypen, von Dermatitis und inflammatorischem Hautstress untersucht werden. Daher ist Alox12b ein geeigneter Ansatzpunkt, um lipidmetabolische Beiträge zur Funktion epithelialer Barrieren und zur kutanen Immun-Signalübertragung zu analysieren.

Das Epidermis-type 12-LO CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Alox12b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Alox12b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Alox12b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Epidermis-type 12-LO-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Alox12b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Epidermis-type 12-LO-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Alox12b-Exone abzielen, die für die Epidermis-type 12-LO-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Alox12b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Epidermis-type 12-LO CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Epidermis-type 12-LO CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Alox12b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Epidermis-type 12-LO HDR-Plasmid (m) und Epidermis-type 12-LO HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Alox12b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Alox12b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.