Plasmide Double Nickase (m) ephrin-A5: sc-420123-NIC

Efna5 code l’éphrine‑A5, un ligand ancré par GPI des récepteurs EphA à activité tyrosine kinase, qui assure une signalisation dépendante du contact afin de coordonner le positionnement cellulaire, la formation de frontières et le guidage axonal au cours du développement du système nerveux. Les interactions éphrine‑A5–EphA régulent le remodelage du cytosquelette et la dynamique d’adhérence via les GTPases de la famille Rho, influençant la croissance des neurites, le ciblage synaptique et l’organisation des tissus. Dans des modèles murins, une altération de la signalisation de l’éphrine‑A5 a été associée à des défauts de cartographie des axones corticothalamiques et rétiniens, des circuits hippocampiques et d’autres processus neurodéveloppementaux. La dérégulation des voies Eph/éphrine est également étudiée dans des contextes de migration et d’invasion cellulaires aberrantes, ce qui fait d’Efna5 une cible pertinente pour la recherche mécanistique en neurobiologie du développement et dans la signalisation associée aux maladies.

ephrin-A5 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Efna5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Efna5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Efna5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Efna5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.