Plásmido Doble Nickase (h) EphB6: sc-403979-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)EphB6 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa EphB6 (h) y el plásmido de doble nickasa EphB6 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EPHB6. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: EphB6 Anticuerpo (D-7): sc-398795
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) EphB6 | sc-403979-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) EphB6 | sc-403979-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHB6 codifica EphB6, un miembro con actividad quinasa deficiente de la familia de receptores tirosina quinasa Eph, que regula la comunicación célula–célula mediante interacciones con ligandos ephrin-B. EphB6 participa en señalización dependiente de contacto que modula la remodelación del citoesqueleto, la adhesión y la migración direccional, e influye en procesos como la organización epitelial y el comportamiento de las células inmunitarias. A través del crosstalk con vías que incluyen la señalización de GTPasas Rho y las redes MAPK/ERK y PI3K/AKT, EphB6 puede moldear programas transcripcionales aguas abajo y decisiones sobre el destino celular. La alteración de la expresión de EPHB6 se ha asociado con la progresión tumoral y fenotipos metastásicos en múltiples contextos de cáncer, lo que respalda su uso como diana en estudios mecanísticos de invasión y de señalización del microambiente.
EphB6 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EPHB6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EPHB6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EPHB6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EPHB6 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.