Plasmide CRISPR d'Activation (m) EphB6: sc-420202-ACT

Le gène murin *Ephb6* code EphB6, un membre à activité kinase altérée de la famille des récepteurs tyrosine kinases Eph, qui module la signalisation cellule‑cellule médiée par les éphrines. EphB6 participe à des voies contrôlant l’adhésion dépendante du contact, le remodelage du cytosquelette et la migration cellulaire directionnelle, et peut influencer en aval la signalisation des GTPases de la famille Rho et des MAPK via le regroupement des récepteurs et des interactions avec des corécepteurs. Dans les tissus en développement comme chez l’adulte, EphB6 contribue à la formation de frontières tissulaires et à la communication entre cellules immunitaires, des processus souvent impliqués dans une organisation tissulaire altérée et des réponses inflammatoires dérégulées. Des modifications de la signalisation Eph/éphrine sont largement associées à une motilité aberrante et à des interactions anormales avec le microenvironnement, rendant la régulation d’EphB6 pertinente pour des études mécanistiques en modèles de développement, de neurobiologie et de biologie du cancer.

EphB6 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ephb6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EphB6 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ephb6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ephb6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EphB6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ephb6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EphB6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EphB6 dans les cellules tumorales présentant une expression de Ephb6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.