Plasmide CRISPR d'Activation (h) EphB2: sc-401642-ACT

EPHB2 code pour la tyrosine kinase réceptrice humaine EphB2, membre du système de signalisation Eph/éphrine qui assure une communication dépendante du contact et contrôle le positionnement cellulaire, la formation de frontières tissulaires et le guidage axonal. L’activation d’EphB2 par des ligands éphrine‑B régule le remodelage du cytosquelette, la dynamique d’adhérence et la migration via des voies impliquant les GTPases de la famille Rho, la signalisation MAPK et des réseaux liés à PI3K. Dans les tissus des mammifères, EphB2 contribue à l’organisation du développement et au maintien de l’architecture épithéliale, et une signalisation EphB2 dérégulée a été associée à des modifications de l’invasivité et des états de différenciation en cancérologie. EPHB2 est également étudié dans le contexte des processus neurodéveloppementaux et de l’organisation synaptique, où des interactions récepteur‑ligand graduées influencent la formation des circuits.

EphB2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EPHB2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EphB2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EPHB2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EPHB2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EphB2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EPHB2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EphB2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EphB2 dans les cellules tumorales présentant une expression de EPHB2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.