Plasmide Double Nickase (h) EphB1: sc-401429-NIC

EPHB1 code EphB1, une tyrosine kinase réceptrice de la famille Eph qui se lie à des ligands éphrine‑B ancrés à la membrane et déclenche une signalisation dépendante du contact. EphB1 régule le guidage axonal, l’organisation synaptique, la migration cellulaire et la formation de frontières grâce à une signalisation bidirectionnelle et à la modulation en aval des GTPases de la famille Rho, des cascades MAPK/ERK et des voies associées à PI3K. Dans des contextes épithéliaux et neuronaux, les signaux dépendants d’EphB1 influencent la dynamique d’adhérence et le remodelage du cytosquelette, façonnant l’architecture tissulaire et le positionnement cellulaire. Une signalisation EphB1 dérégulée a été associée à des altérations de la mise en place des motifs développementaux et a été étudiée en biologie du cancer pour ses rôles dans l’invasivité, les interactions avec le microenvironnement tumoral et les interconnexions entre voies de signalisation.

EphB1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EPHB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EPHB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EPHB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EPHB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.