Plasmide CRISPR d'Activation (m) EphA7: sc-420197-ACT

Le gène murin **Epha7** code **EphA7**, une tyrosine kinase réceptrice de l’axe de signalisation éphrine‑A/Eph, qui assure une communication cellulaire dépendante du contact afin de réguler le positionnement cellulaire, l’adhésion et le guidage répulsif. La signalisation d’EphA7 coordonne le remodelage du cytosquelette via les GTPases de la famille Rho et s’intègre aux voies associées à MAPK/ERK et à PI3K pour moduler, selon le contexte, la prolifération, la différenciation et la survie. Dans le système nerveux, EphA7 contribue au guidage axonal, à la connectivité neuronale et à la formation de frontières au cours du développement, avec des rôles supplémentaires rapportés dans l’organisation des tissus épithéliaux et mésenchymateux. Une activité dérégulée d’EphA7 a été associée à des altérations de la mise en place des patrons développementaux et a été étudiée dans des processus pertinents pour la maladie, tels que la migration/l’invasion des cellules tumorales et un contrôle anormal de la croissance.

EphA7 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Epha7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EphA7 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Epha7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Epha7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EphA7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Epha7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EphA7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EphA7 dans les cellules tumorales présentant une expression de Epha7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.