Plasmide Double Nickase (h) EphA3: sc-401565-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) EphA3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide EphA3 Double Nickase (h) et le plasmide EphA3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EPHA3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: EphA3 Antibody (D-2): sc-514209
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) EphA3 | sc-401565-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) EphA3 | sc-401565-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHA3 code pour EphA3, une tyrosine kinase réceptrice du réseau de signalisation des éphrines A, qui régule la communication cellule–cellule, la mise en place des tissus et le remodelage du cytosquelette. Lors de la liaison à une éphrine, EphA3 module une signalisation bidirectionnelle qui s’articule avec les GTPases de la famille Rho ainsi qu’avec les voies associées à MAPK et PI3K, afin d’ajuster l’adhérence cellulaire, la migration et la formation de frontières. Une expression ou une signalisation d’EPHA3 dérégulée a été associée à des programmes de développement altérés et à des phénotypes de croissance et d’invasion aberrants dans de multiples contextes cancéreux, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier le guidage dépendant des récepteurs et les interactions avec le microenvironnement tumoral. Dans des modèles de cellules humaines, la signalisation dépendante d’EphA3 offre un système exploitable pour analyser la dynamique de la signalisation dépendante du contact et les réponses transcriptionnelles en aval.
EphA3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EPHA3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EPHA3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EPHA3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EPHA3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.