Plásmido Doble Nickase (h) EPAS-1/HIF-2 alpha: sc-400647-NIC

EPAS1 codifica EPAS-1/HIF-2 alfa, un factor de transcripción bHLH-PAS sensible al oxígeno que forma un heterodímero con ARNT (HIF-1β) para coordinar la expresión génica adaptativa a la hipoxia. En condiciones de bajo oxígeno, EPAS-1/HIF-2 alfa evita la degradación mediada por prolil hidroxilasas y VHL, se acumula en el núcleo y activa programas que controlan la angiogénesis, la eritropoyesis, el metabolismo del hierro y la reprogramación metabólica. La señalización de EPAS1 interactúa con las vías PI3K–AKT–mTOR y MAPK y contribuye a las decisiones de destino celular en el endotelio y otros tejidos sensibles al oxígeno. La actividad desregulada de EPAS1 y la señalización hipóxica alterada se han implicado en la biología tumoral y la remodelación vascular, y variantes de EPAS1 se han asociado con trastornos de la detección de oxígeno.

EPAS-1/HIF-2 alpha El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EPAS1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EPAS1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EPAS1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EPAS1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.