Plasmide CRISPR/Cas9 KO EP3 (h): sc-402485

Présentation

PTGER3 code le récepteur EP3 de la prostaglandine E2, un GPCR de type rhodopsine qui se couple à Gi/o (et, dans certains contextes, à Gq) pour réguler l’activité de l’adénylate cyclase, la signalisation via l’AMPc et les voies de kinases en aval. L’activation d’EP3 module des processus tels que l’inflammation, le tonus vasculaire et du muscle lisse, la fonction plaquettaire et la régulation de la barrière épithéliale, via un contrôle dépendant du contexte des seconds messagers et des réponses transcriptionnelles. PTGER3 participe à des réseaux de signalisation des eicosanoïdes et de l’acide arachidonique qui intègrent les signaux prostaglandines dérivés des COX aux programmes immunitaires et métaboliques. Une signalisation EP3 dérégulée a été associée à des phénotypes inflammatoires et cardiométaboliques et fait l’objet d’études fréquentes en cancérologie et sur le microenvironnement, où les voies des prostaglandines influencent la prolifération, la migration et l’échappement immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EP3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PTGER3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PTGER3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PTGER3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EP3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PTGER3 pour l'étude de la signalisation de EP3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PTGER3 essentiels à la fonction de EP3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PTGER3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PTGER3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EP3 plasmide HDR (h) et le EP3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PTGER3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PTGER3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.