Plasmide CRISPR d'Activation (h) Eos: sc-402330-ACT

IKZF4 (Eos) est un facteur de transcription à doigts de zinc de la famille Ikaros, qui agit comme régulateur contextuel de l’expression génique dans les lignées hématopoïétiques, avec des rôles majeurs dans la différenciation des lymphocytes T et l’homéostasie immunitaire. Eos participe au remodelage de la chromatine ainsi qu’à des programmes de répression/activation transcriptionnelle qui façonnent les réponses de signalisation des cytokines et les réseaux transcriptionnels spécifiques de lignée. Par ses interactions avec des complexes corégulateurs, IKZF4 contribue à coordonner les décisions de destin cellulaire, les seuils d’activation et le maintien de phénotypes régulateurs. Une activité dérégulée d’IKZF4 et des profils d’expression altérés ont été impliqués dans des processus pathobiologiques à médiation immunitaire et sont étudiés pour leur contribution à la signalisation inflammatoire et à des états transcriptionnels associés aux maladies hématologiques.

Eos Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IKZF4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Eos Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IKZF4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IKZF4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Eos. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IKZF4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Eos au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Eos dans les cellules tumorales présentant une expression de IKZF4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.