Plasmide CRISPR/Cas9 KO EOMES (m): sc-420182

Présentation

Eomes (EOMES) code un facteur de transcription de la famille T-box qui orchestre les décisions de destinée cellulaire au cours du développement de la souris et de la différenciation immunitaire. EOMES régule des programmes transcriptionnels contrôlant la formation du mésoderme, la mise en place précoce du plan d’organisation embryonnaire et la spécification des lignages, et constitue un nœud clé de voies qui façonnent la maturation et la fonction effectrice des lymphocytes cytotoxiques, notamment les réponses des cellules NK et des lymphocytes T CD8+. Par des interactions dépendantes du contexte avec des régulateurs de la chromatine et des réseaux de signalisation induits par les cytokines, EOMES influence la prolifération, la migration et les états de différenciation terminale. Une activité d’EOMES dérégulée a été impliquée dans des altérations de l’homéostasie immunitaire et des phénotypes développementaux, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel en développement et en immunologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EOMES (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Eomes dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Eomes, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Eomes à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EOMES.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Eomes pour l'étude de la signalisation de EOMES, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Eomes essentiels à la fonction de EOMES
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Eomes pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EOMES plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le EOMES plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Eomes. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EOMES plasmide HDR (m) et le EOMES (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Eomes pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Eomes définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.