Plasmide CRISPR d'Activation (h) EOMES: sc-403485-ACT

EOMES (eomesodermine) est un facteur de transcription de la famille T-box qui orchestre l’engagement de lignée et les programmes de différenciation au cours du développement et au sein du système immunitaire. Dans les lymphocytes T et NK humains, EOMES intègre les signaux issus des cytokines et du TCR afin de réguler des réseaux transcriptionnels contrôlant la fonction effectrice cytotoxique, la différenciation en cellules mémoire et les réponses liées à l’interféron‑γ. Son activité s’inscrit dans des circuits plus larges de régulation génique qui déterminent les décisions de destinée cellulaire, notamment via le remodelage de la chromatine et l’utilisation d’activateurs transcriptionnels (enhancers). Une expression dérégulée d’EOMES a été associée à des états immunitaires altérés et a été étudiée dans des contextes tels que l’immunologie tumorale, les infections chroniques et les mécanismes des maladies inflammatoires.

EOMES Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EOMES sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EOMES Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EOMES dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EOMES, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EOMES. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EOMES natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EOMES au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EOMES dans les cellules tumorales présentant une expression de EOMES silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.