Plasmide Double Nickase (h) ENX-2: sc-403611-NIC

EZH1 code la méthyltransférase d’histones du groupe Polycomb ENX-2, un composant catalytique de PRC2 qui dépose la marque H3K27me3 afin d’établir et de maintenir des programmes de répression transcriptionnelle. ENX-2 contribue à la compaction de la chromatine, au contrôle de l’identité cellulaire et à la régulation des gènes du développement, en agissant de concert avec les partenaires centraux de PRC2 pour moduler des réseaux transcriptionnels spécifiques de lignée. Dans les cellules humaines, l’activité d’EZH1 s’inscrit à l’interface de la reprogrammation épigénétique, du contrôle du cycle cellulaire et des voies de différenciation, en complément d’EZH2, pour façonner des paysages de chromatine répressive. Une inhibition/dérégulation du silençage médié par PRC2/EZH1 et des états altérés de méthylation de H3K27 sont impliqués dans une reconfiguration transcriptionnelle oncogénique et dans d’autres maladies liées à une régulation épigénétique aberrante.

ENX-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EZH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EZH1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EZH1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EZH1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.